细胞毒实验：药物梯度设置和药物配比计算

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2023-2-23

基础实验

认识单位

体积摩尔浓度（即物质的量浓度）可简写为 M，表示mol/L

nM (nmol/L)

μM (μmol/L)

mM (mmol/L)

M (mol/L)

1 μM=1000 nM

1 mM=1000 μM

1 M=1000 mM

1 M=1 mol/L = 1 mol/dm³

在摩尔计算中，体积摩尔浓度(Molarity)和质量摩尔浓度(Molality)是不一样的。

体积摩尔浓度单位为mol/L，而质量摩尔浓度单位是mol/kg

实验准备

查文献：药物IC50值（如10μM）

设置浓度梯度

药物的浓度（终浓度）一般应在nM～μM级，而母液常规是10～30 mM（in DMSO）

药物浓度梯度点为6～10个为宜（包含0浓度）；

过少：可能绘制不出好的线

过多：96孔板不宜安排排布, 配药加药容易出错。

常见浓度梯:2、3、5、或10，以3为最常用

2倍：

0, 0.1, 0.2, 0.4, 0.8, 1.6, 3.2, 6.4 μM;

0, 1, 2.5, 5, 10, 25, 50, 100, 250 nM;

3倍：

0, 0.3, 1, 3, 10, 30, 100, 300, 1000 nM;

5倍：

0, 1.6, 8, 40, 200, 1000, 5000 nM;

10倍：

0, 0.004, 0.04, 0.4, 4, 40, 400 μM;

实验设计建议：做两轮梯度实验，第一轮粗，第二轮细。

第一轮低点要在最低参考IC50的1/50以下，高点至少要在最高参考IC50的50倍以上。

第二轮等比数列可以缩小一级，或者在第一轮的IC50区间增加密度，但注意第二轮不能太细，或者区间太窄。

药物配比（96孔板）

已知条件

应用液：1nmol/μL=1mM

相关文献显示在细胞中IC50为10μM

96孔板

重复6复孔

6个梯度

实验准备

浓度梯度分组：0μM 2.5μM 5μM 10μM 20μM 40μM

物品准备：配制好的药物、96孔板培养的已贴壁细胞、移液枪、配对枪头、培养基等

计算配药

设定

每孔中已含有100ul 10%FBS培养基

每孔中加入100ul药物溶液

倍比稀释

	孔
40μM	100μl原培养液+100μl80μM药物溶液=200μl40μM
20μM	100μl原培养液+100μl40μM药物溶液=200μl20μM
10μM	100μl原培养液+100μl20μM药物溶液=200μl10μM
5μM	100μl原培养液+100μl10μM药物溶液=200μl5μM
2.5μM	100μl原培养液+100μl5μM药物溶液=200μl2.5μM
0μM	200μl培养液=200μl0μM